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影響微反應(yīng)量熱儀基線位置的因素有哪些?

更新時(shí)間:2021-10-15      點(diǎn)擊次數(shù):1663
  等溫滴定量熱法是近年來發(fā)展起來的一種研究生物熱力學(xué)與生物動(dòng)力學(xué)的重要方法,它通過高靈敏度、高自動(dòng)化的微反應(yīng)量熱儀連續(xù)、準(zhǔn)確地監(jiān)測(cè)和記錄一個(gè)變化過程的量熱曲線,原位、在線和無損傷地同時(shí)提供熱力學(xué)和動(dòng)力學(xué)信息。
 
  在使用過程中會(huì)出現(xiàn)基線位置變化的問題,在這里整理了會(huì)影響基線位置的一些主要因素,
 
  1、在安裝ITC儀器時(shí),避免安裝在陽光直射的位置,以免導(dǎo)致長(zhǎng)時(shí)間的陽光直射造成溫度沿滴定針傳導(dǎo)至樣品池,造成基線的漂移。
 
  2、在安裝ITC儀器時(shí),不要安裝空調(diào)口直吹的位置,以免導(dǎo)致長(zhǎng)時(shí)間空調(diào)直吹造成溫度沿滴定針傳導(dǎo)至樣品池,造成基線的漂移。
 
  3、人為操作的不小心,如滴定針不小心被碰彎了(經(jīng)常發(fā)生,當(dāng)?shù)味ㄡ樂旁赗est Position的時(shí)候,但是很多情況不容易發(fā)現(xiàn)),彎曲的滴定針有可能在滴定時(shí)持續(xù)摩擦樣品池側(cè)壁,造成樣品池溫度升高。
 
  4、安裝的不到位或者固定的螺栓松了。在更換滴定針后滴定針有可能安裝不到位(露出Pipette底部的玻璃針管過長(zhǎng))或者長(zhǎng)時(shí)間使用后固定滴定針的螺栓發(fā)生松動(dòng)導(dǎo)致滴定針下沉,可能導(dǎo)致滴定時(shí)由于滴定針過長(zhǎng)摩擦樣品池底部,造成樣品池溫度升高。
 
  5、攪拌速率的影響。不同的攪拌速率會(huì)帶來不同的熱量釋放(攪拌速率越高,溫度越高,基線越低,反之亦然。)。一般在ITC實(shí)驗(yàn)中,我們都設(shè)置的是恒定的攪拌速率,一般不會(huì)由于攪拌速率改變?cè)斐苫€的變化。但在某些Pipette故障或者樣品粘度較高造成攪拌器轉(zhuǎn)動(dòng)不均時(shí),可能會(huì)導(dǎo)致樣品池?zé)崃康淖兓?br /> 
  6、樣品池中有氣泡。這個(gè)現(xiàn)象可能是最為常見的影響初始基線位置的原因了。樣品溫度、加樣技巧等都可能對(duì)基線有影響。當(dāng)樣品池中存在由于加樣或者樣品因溫度差脫氣造成的小氣泡時(shí)(由于水的比熱容要比空氣大,氣泡占據(jù)了水分子的位置導(dǎo)致樣品池中整體比熱容下降),在給樣品池施加與參考池相同的功率時(shí),樣品池的溫度會(huì)比參考池稍高,進(jìn)而使傳感器“誤認(rèn)為”樣品池更熱,從而減少給樣品池的功率,造成基線下降。在出色的操作技巧下,實(shí)際的初始基線一般和設(shè)定的Reference Power相差0.1ucal/s左右,當(dāng)然,一般情況下,±1 ucal/s的初始基線位置偏離一般是可以接受的。有一個(gè)需要注意的問題是,當(dāng)操作含有Detergent(如Triton X100, NP40等)的膜蛋白樣品時(shí),建議小心的一次加樣完成,不建議通過吸打的方式排出氣泡,這樣可能會(huì)使問題更加嚴(yán)重
 
  7、參考池中有氣泡。這個(gè)現(xiàn)象與上面描述的現(xiàn)象正好相反。
 
  8、基線呈階梯狀下降。 當(dāng)?shù)味ㄡ樦袃H有空氣或者沒有*充滿樣品時(shí),在滴定過程中,隨著樣品的注入,樣品池中由于空氣的不斷注入導(dǎo)致樣品池的比熱容一直在降低,導(dǎo)致基線呈階梯狀下降;另一種可能的原因連接滴定針的Fill Port Adaptor (FPA) 磨損造成的,這種情況需要更換新的FPA;在使用ITC研究酶促動(dòng)力學(xué)的過程中,也會(huì)出現(xiàn)類似的現(xiàn)象,可以考慮反應(yīng)物之間是否存在可能的催化過程。
 
  9、樣品池中未充滿。 當(dāng)樣品池沒有*充滿時(shí),隨著滴定針中反應(yīng)物的逐漸注入,樣品池逐漸充滿,導(dǎo)致樣品池中的比熱容逐漸提高,導(dǎo)致基線呈階梯狀上升。因此,請(qǐng)加滿280 ul樣品并排出氣泡。
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